基因探针是什么?

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基因探针是什么?

基因探针(probe)又称“寡核苷酸探针”,简称“探针”,就是一段与目的基因或DNA互补的特异核苷酸序列,它可以包括整个基因,也可以仅仅是/基因的一部分;可以是DNA本身,也可以是由之转录而来的RNA。

1.探针的来源 DNA探针根据其来源有3种:一种来自基因组中有关的基因本身,称为基因组探针(genomic probe);另一种是从相应的基因转录获得了mRNA,再通过逆转录得到的探针,称为cDNa 探针(cDNa probe)。与基因组探针不同的是,cDNA探针不含有内含子序列。此外,还可在体外人工合成碱基数不多的与基因序列互补的DN**段,称为寡核苷酸探针。

2.探针的制备 进行分子突变需要大量的探针拷贝,后者一般是通过分子**(molecular cloning)获得的。**是指用无性繁殖方法获得同一个体、细胞或分子的大量复制品。当制备基因组DNA探针进,应先制备基因组文库,即把基因组DNA打断,或用限制性酶作不完全水解,得到许多大小不等的随机片段,将这些片段体外重组到运载体(噬菌体、质粒等)中去,再将后者转染适当的宿主细胞如大肠肝菌,这时在固体培养基上可以得到许多携带有不同DN**段的**噬菌斑,通过原位杂交,从中可筛出含有目的基因片段的**,然后通过细胞扩增,制备出大量的探针。

为了制备cDNA 探针,首先需分离纯化相应mRNA,这从含有大量mRNA的组织、细胞中比较容易做到,如从造血细胞中制备α或β珠蛋白mRNA。有了mRNA作模板后,在逆转录酶的作用下,就可以合成与之互补的DNA(即cDNA),cDNA与待测基因的编码区有完全相同的碱基顺序,但内含子已在加工过程中切除。

寡核苷酸探针是人工合成的,与已知基因DNA互补的,长度可从十几到几十个核苷酸的片段。如仅知蛋白质的氨基酸顺序量,也可以按氨基酸的密码推导出核苷酸序列,并用化学方法合成。

3.探针的标记 为了确定探针是否与相应的基因组DNA杂交,有必要对探针加以标记,以便在结合部位获得可识别的信号,通常采用放射性同位素32P标记探针的某种核苷酸α磷酸基。但近年来已发展了一些用非同位素如生物素、***配体等作为标记物的方法。但都不及同位素敏感。非同位素标记的优点是保存时间较长,而且避免了同位素的污染。最常用的探针标记法是缺口平移法(nick translation)。首先用适当浓度的DNA酶Ⅰ(DNAseⅠ)在探针DNA双链上造成缺口,然后再借助于DNA聚合酶Ⅰ(DNa poly merasⅠ)的5’→3’的外切酶活性,切去带有5’磷酸的核苷酸;同时又利用该酶的5’→3’聚酶活性,使32P标记的互补核苷酸补入缺口,DNA聚合酶Ⅰ的这两种活性的交替作用,使缺口不断向3’的方向移动,同时DNA链上的核苷酸不断为32P标记的核苷酸所取代。

探针的标记也可以采用随机引物法,即向变性的探针溶液加入6个核苷酸的随机DNA小片段,作为引物,当后者与单链DNA互补结合后,按碱基互补原则不断在其3’OH端添加同位素标记的单核苷酸,这样也可以获得比放射性很高的DNA探针。

DNA探针的作用是什么? (高三基因工程) DNA分子杂交技术又是什么?在哪里用到?

DNA探针的作用是用DNA探针进行的杂交试验。将未配对结合的探针洗去后,可用放射自显影或酶联反应等检测系统检测杂交反应中单个碱基突变和单个碱基的错配。

基因探针是什么?

DNA分子杂交技术是一种对基因工程中基因是否进入受体细胞的检测技术。有别于分子杂交技术,DNA分子杂交技术是针对于DNA而言,分子杂交技术针对对象可以是DNA也可以是RNA。

DNA分子杂交技术在分子生物学领域中已广泛地使用于**基因的筛选、酶切图谱的制作、基因组**定基因序列的定性、定量检测和疾病的诊断等方面。

扩展资料:

基因组DNA探针的获得有赖于分子**技术的发展和应用。要得到一种特异性DNA探针,常常是比较烦琐的。以细菌为例,细菌的基因组大小约为5×106碱基,约含3000个基因。要获得某细菌特异的核酸探针,通常要采取建立细菌基因组DNA文库的办法。

即将细菌DNA切成小片段后(如用限制性内切酶做不完全水解)分别**得到包含基因组的全信息的**库,然后用多种其他菌种的DNA探针来筛选,产生杂交信号的**被剔除,最后剩下的不与任何其他细菌杂交的**则可能含有该细菌特异性DN**段。

参考资料来源:

百度百科——DNA探针

百度百科—— DNA分子杂交技术

高中生物里讲的探针到底是什么东西

DNA探针是用来干嘛的?

将一段已知序列的多聚核苷酸用同位素、生物素或荧光染料等标记后制成的探针。可与固定在硝酸纤维素膜的DNA或RNA进行互补结合,经放射自显影或其他检测手段就可以判定膜上是否有同源的核酸分子存在。

以病原微生物DNA或RNA的特异性片段为模板,人工合成的带有放射性或生物素标记的单链DN**段,可用来快速检测病原体。

什么是基因探针,用途是什么

什么是分子生物学探针技术

分子病理诊断,探针法,你用的是fish还是荧光定量的探针,两种不一样,前者需要用荧光显微镜,后者需要用荧光定量PCR仪.

dna探针能否用于检测常见遗传病

能,DNA探针利用的是碱基互补配对的原理,可以检测出DNA的序列,当然也就能检测常见的遗传病,但并不能检测所有的遗传病(例如染色体引起的疾病)。
碱基互补配对原理:
DNA含4种碱基:A(腺嘌呤)、T(胸腺嘧啶)、C(胞嘧啶)、G(鸟嘌呤),碱基互补配原则,A只能和T配对,C只能和G配对。