细胞培养实验室的设置应该怎么布置

孟震萍 装修达人 20

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细胞培养实验室的设置应该怎么布置

组织细胞培养技术与其他一般实验室工作的主要区别在于要求保持无菌操作,避免微生物及其他有害因素的影响。目前,超净工作台的广泛使用,很大程度上方便了组织细胞培养工作,并使一些常规实验室有可能用于进行细胞培养。细胞培养实验室应能进行六方面的工作:无菌操作、孵育、制备、清洗、消毒灭菌处理、储藏。1.无菌操作区(1)无菌操作室:无菌操作区只限于细胞培养及其他无菌操作的区域,最好能与外界隔离,不能穿行或受其他干扰。理想的无菌操作室应划为三部分:a) **室—―供更换衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩。b) 缓冲间—―位于**间与操作间之间,目的是为了保证操作间的无菌环境,同时可放置恒温培养箱及某些必需的小型仪器。c) 无菌操作间—―专用于无菌操作、细胞培养。其大小要适当,且其顶部不宜过高(不超过2.5m)以保证紫外线的有效灭菌效果;墙壁光滑无死角以便清洁和消毒。工作台安置不应靠墙壁,台面要光滑压塑作表面,漆成白色或灰色以利于解剖组织及酚红显示pH的观察。无菌操作间的空气消毒:紫外线灯—-产生臭氧,并且室内温度及湿度均较高,不利于工作人员健康。空气过滤的恒温恒湿装置—-最好。表1 洁净室(区)空气洁净度级别表洁净度级别 尘粒最大允许数/立方米 微生物最大允许数 浮游菌/立方米 沉降菌/皿100级 3,500 0 5 110000级 350,000 2,000 100 3100000级 3,500,000 20,000 500 10300000级 10,350,000 60,000 - 15无臭氧紫外线消毒器电子消毒灭菌器—-在高压电场作用下,电子管的内外电极发生强烈电子轰击,使空气电离而将空气中的氧转换成臭氧。臭氧是一种强**剂,能同细菌的胞膜及酶蛋白氢硫基进行**分解反应,从而靠臭氧气体弥漫性扩散达到杀菌之目的,消毒时没有死角。消毒后空间的残留臭氧只需30~40min即能自行还原成氧气,空气不留异味,消毒物体表面不留残毒。(2)净化工作台:操作简单,安装方便,占用空间小且净化效果很好。一般细菌培养室使用的净化工作台主要有两种:a)侧流式或称垂直式 b)外流式或称水平层流式。净化工作台工作原理(大致相同)—-通常是将室内空气经粗过滤器初滤,由离心风机压入静压箱,再经高效空气过滤器精滤,由此送出的洁净气流以一定的均匀的断面风速通过无菌区,从而形成无尘无菌的高洁净度工作环境。侧流式工作台—-空气净化后的气流由左或右侧通过工作台面流向对侧,也有从上向下或从下向上流向对侧,形成气流屏障保持工作区无菌。工作台结构为封闭式。外流式(水平式)工作台—-净化后的空气面向操作者流动,因而外方气流不致混入操作,但进行有害物质实验操作则对操作者不利。工作台结构为开放式(已少用)。 楼主有空的话可以自己去生物帮那里查找一下这方面的信息,我在那里看到过这方面的介绍,挺全面的有空的话可以去 ****bio1000***m/zt/cell/45828.html 那里看看,应该会有帮助的。

细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项

一、细胞复苏

细胞培养实验室的设置应该怎么布置

将冻存细胞从液氮中取出后,在37℃水浴锅内不断摇动促进其融化。移人15ml离心管中,加入10ml预热的DMEM完全培养基,轻轻吹匀,离心,2000rpmX2min,弃上清液。

加入10ml DMEM培养基清洗,弃上清液。加入10ml DMEM完全培养基,轻轻吹打,接种于10cm盘中,在含5%CO2的细胞培养箱中培养。

二、细胞传代

细胞密度达到80%~90%时.去培养基,10ml PBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶,放人细胞培养箱3min。加人1ml DMEM完全培养基终止胰酶消化,转移至15ml离心管。

加入10ml PBS清洗细胞培养盘,转移至15ml离心管,2000rpmX2min,弃上清液。再加入10ml PBS(经高压灭菌,保存于40C),吹匀,吸取10微升进行计数,按照1×106/盘接种,在含5%CO2的细胞培养箱继续培养。

三、细胞冻存

细胞密度达到80%~90%时,去培养基,10ml PBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶,放人细胞培养箱3min。加入lmlDMEM完全培养基终止胰酶消化,转移至15ml离心管。加入10ml PBS清洗细胞培养盘,转移至15ml离心管,2000rpmX2min,弃上清液。

加入lml冻存液(90%血清,10%DMSO),放入冻存盒内(盒内有异丙醇,以保证温度降低的速度),立即放入一80℃冰箱内,过夜,第二天放入液氮中,可以保存至少两年,如不放人液氮,可以保存三个月。

冻存液的配制:70%的完全培养基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加,边滴边摇。

注意事项

(1)进入细胞间开始细胞培养时,必须严格按照下列步骤操作:

①确定所有的细胞操作用的溶液和耗材都已经消毒并检测没有问题,不确定的溶液和耗材请勿使用,除非特殊情况,不要借用别人的溶液。

②确定衣服的袖口已经卷起或者白大褂的袖口已经扎紧。

③确定酒精灯内的酒精量,需要的话及时进行补充。

④确定所有需要用到的溶液和耗材都放在伸手可及的位置。为了方便单手开启瓶盖,实验开始前可以把所有瓶盖旋松。

⑤尽量不要直接倾倒溶液,除非瓶口没有被烧坏。如果倾倒失败,溶液粘在瓶口,请用喷过75%酒精的纸巾仔细清洁瓶口周围(不要接触到瓶口)后在火焰上简单烧灼。

⑥操作时如果不能肯定所用的耗材是洁净的,必须及时更换。

⑦实验完毕及时收拾,保持工作区域清洁整齐,最后用75%酒精清洁台面。

(2)细胞污染的预防

①实验用品防止污染。细胞培养所用试剂、耗材、器材的清洗、消毒要彻底,各种溶液灭菌要仔细,并在无菌实验检测*性后才能使用。操作室及剩余的无菌器材要定期清洁、消毒、灭菌。

②操作过程防止污染。

③穿着容易起静电或吸附灰尘的衣物必须更换为白大褂后才能进入细胞间。

④实验开始前需要确定戴的手套没有问题,只要接触过生物安全柜之外的物品,必须及时对手套进行消毒。

⑤进入细胞培养间后关好门,坐下来尽量少走动以免影响生物安全柜的风帘。工作开始前要先用75%酒精棉球擦手和瓶盖。事先要严格检查所用的器材、溶液和细胞,不要把污染品或未经消毒的物品带入无菌室内,更不能随便使用,以免造成大规模污染。

⑥细胞操作时动作要轻,必须在火焰周围无菌区内打开瓶口,并将瓶口放在火焰周围简单转动烧灼,注意不要让火焰把塑料瓶口烧化。

⑦实验操作时生物安全柜的隔板要尽可能放低,尽量减少谈话,打喷嚏或咳嗽时绝对不能对着工作区,以免造成不必要的污染。

⑧瓶盖应当倒放在远离自己的地方,以避免瓶盖被误操作所污染。

⑨不要从敞开的容器口上方经过,以避免衣服上掉落不明物体对细胞的污染。

⑩实验操作时要注意及时更换巴斯德吸管、移液**头和移液管,切勿一根管子做到底。一旦发现接触了非洁净或者无法确定洁净的物品必须直接丢弃。实验完毕应及时收拾,保持实验室清洁整齐,最后用75%酒精清洁台面。

(3)防止细胞交叉污染

①在进行多种细胞培养操作时,所用器具要严格区分,最好作上标记便于辨别。按顺序进行操作,一次只处理一种细胞,多种细胞多种操作一起进行时易发生t昆乱。

②在进行换液或传代操作时,粘有细胞的移液*头和移液管不要触及试剂瓶瓶口,以免把细胞带到培养基中污染其他细胞。

③所有细胞一旦购置,或从别处引入,或自己建立,必须及时保种冻存,一旦发生污染可重新复苏细胞,继续培养。

扩展资料:

细胞培养(cell culture)是指在体外模拟体内环境(无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等),使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。细胞培养也叫细胞**技术,在生物学中的正规名词为细胞培养技术。

不论对于整个生物工程技术,还是其中之一的生物**技术来说,细胞培养都是一个必不可少的过程,细胞培养本身就是细胞的大规模**。细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞,这是**技术必不可少的环节,而且细胞培养本身就是细胞的**。

细胞培养技术是细胞生物学研究方法中重要和常用技术,通过细胞培养既可以获得大量细胞,又可以借此研究细胞的信号转导、细胞的合成代谢、细胞的生长增殖等。

参考资料:百度百科:细胞培养

生物实验的基本仪器有哪些

首先要明确生物实验室有不同的侧重和分类,如微生物实验室、细胞生物学实验室、分子生物学实验室、组织培养实验室等。根据不同的生物实验室,其常用的仪器也有所不同。
一般来说,微生物实验室常用仪器有:恒温培养箱、霉菌培养箱、生化培养箱、超净工作台、高压灭菌器、烘箱、加热板、电炉、电子分析天平、磁力搅拌器、水浴锅、摇床、离心机、低温保存箱、移液器、PH计、分光光度计、光学显微镜、扫描显微镜、均质器等。
分子生物学以及细胞生物学实验室常用仪器有:二**碳培养箱、生物安全柜、低温保存箱、烘箱、高压灭菌器、分析天平、普通天平、移液器、离心机、倒置显微镜、PCR仪、电泳仪、脱色摇床等。
组织培养实验室常用仪器有:高压灭菌器、烘箱、摇床、光照培养箱、人工气候培养箱、分析天平、普通天平、超净工作台等。
而从实验室工作流程来看,则分为样品保存、样品前处理、培养过程、观察分析等。在不同的工作环节则需要不同的仪器。
一般来说,样品保存常用仪器有冰箱/超低温冰箱、液氮罐等。样品前处理常用仪器有移液器、天平、均质/搅拌系列、离心机、冻干机、高压灭菌器以及电泳仪等。
在培养过程常用仪器有培养箱系列、生物安全柜/超净工作台、发酵罐、摇床、水浴、转瓶机、PCR仪、酶标仪等。观察分析时常用仪器有显微镜、菌落计数仪、流式细胞仪、DNA测序仪、高效色谱系列等。在生物实验室中还可能会用到洗瓶机、超纯水系列、***清洗机等仪器。

生物类实训室对于环境有哪些要求

生物类实训室对于环境要求通风。

对于饲养动物的**生物安全实验室主实验室,其相对于大气的最小负压不得小于-50Pa;动物四级生物安全实验室主实验室相对于大气的最小负压不应小于-60Pa。动物生物安全实验室的参数应符合GB14925-2001《实验动物 环境及设施》的有关要求。

不像其他种类的特殊实验室,这类的实验室并不一定需和大众交通分隔出来,而在这类实验室中仅需要再开放实验台上依循微生物学操作技术规范(GMT)即可。在一般情况下,被污染的材料都留在开放废弃物容器。

扩展资料:

技术指标:

生物安全实验室一般实施两级隔离。一级隔离通过生物安全柜、负压隔离器、正压防护服、手套、眼罩等实现;二级隔离通过实验室的建筑、空调净化和电气控制系统来实现。**~四级生物安全实验室应实施两级隔离。

生物安全主实验室二级隔离的主要技术指标应符合表1.2的规定。本表中的噪声不包括生物安全柜、动物隔离器的噪声,如果包括上述设备的噪声,则最大不应超过68 dB(A)。

参考资料来源:百度百科-生物安全实验室

对新建细胞系或株的细胞确认试验可采用哪些方法?列举一种或以上方法并说明其原理

细胞鉴别试验的方法有多种,根据检测目标分类包括细胞水平(形态、分类特征)、染色体水平、分子水平(生化、酶学、分子生物学特征);根据方法学分类,包括细胞遗传学检测,免疫学检测,生物化学检测和分子生物学检测等。目前,常用的细胞鉴别试验方法包括细胞形态学检查、种属特异性抗原的检测、染色体核型分析、同功酶分析、限制性内切酶分析等等。
细胞形态学检查:通常在细胞接种24小时和48小时后,用100倍显微镜检查,观察细胞在低密度和高密度生长时的形态。这种方法比较直观,但只是一个比较粗略的鉴别方法,并且与检测人员的经验密切相关。
种属特异性抗原检测:也就是用种属特异性抗血清来检测种属特异性抗原,比如间接免疫荧光抗体染色。这种方法操作起来比较简单,但是试验敏感性较差,也就是如果存在少量的细胞污染不能分辨出来。
染色体核型分析:多数情况下,不同细胞的染色体结构是有明显差别的,因此可以利用这些差别进行细胞种属的鉴别。但是需要提醒的是,亲缘关系接近的灵长类动物细胞的染色特征就比较接近,因此要注意仔细辨别每一谱带的特点。试验时,应从同一世代不同细胞培养瓶中取细胞混合再培养,制备染色体标本片。染色体标本应长期保存(直至褪色不能用为止),以备复查。染色体核型分析是一个比较精确的检测方法,但试验操作比较复杂,需要对试验人员进行培训。
同功酶分析(Isoenzyme Analysis):不同种属的细胞所表达的同功酶是不同的,因此可以利用同功酶分析来进行细胞的鉴别。该方法通常检测以下四种同功酶:葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)、*酸脱氢酶(LDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)和核苷磷酸化酶(NP)。试验时,通常要设一个小鼠源细胞(如L929细胞系)标准品和人源细胞(如Hela S3细胞系)的对照品。检测性能比较可靠,但是价格比较昂贵。
限制性酶切图谱分析(restriction digest analysis):首先,使用商品化试剂盒或其它方法提取细胞基质的基因组DNA,一般要求细胞数在2~5×106细胞,并进行核酸定量,然后进行限制性内切酶的消化,再进行琼脂糖电泳观察电泳条带的特点。这种方法可操作性较好,灵敏度较高,不仅可以鉴别细胞种属,对于细胞间交叉污染的检测也是相当灵敏的,但是公认具有种属特异性的内切酶的选择是本方法的关键。
随着分子生物学技术的发展,许多新的技术方法也开始应用,如种属特异性的β-球蛋白或其它特征性基因片段的PCR方法、DNA指纹分析、HLA表面抗原鉴定试验等。这些方法的检测灵敏度和特异性均较前有所改进,但其可操作性如何,还需要进行不断地实践。由于不同的细胞鉴别试验方法具有不同的检测特性和灵敏度,因此应结合具体细胞的固有特性进行适宜的组合和选择,但最终应以实现正确鉴别为目的。

白细胞有什么作用?

人体细胞结构和功能有哪些

人体细胞结构和功能有哪些
主要结构:细胞膜(保护并控制与外界环境进行物质交换)、细胞核(含有遗传物质、生命活动的控制中心)、细胞质(生命活动的重要场所)
细胞器:核仁、细胞核、核糖体、囊泡、粗糙内质网、高尔基体、细胞骨架、平滑内质网、线粒体、细胞质、中心体、溶酶体等。
1、细胞壁
分类在细菌、真菌、植物的生物,其组成的细胞都具有细胞壁(Cell Wall),而原生生物则有一部分的生物体具有此构造,但是动物没有。
(1)植物细胞壁主要成分是纤维素,经过有系统的编织形成网状的外壁。可分为中胶层、初生细胞壁、次生细胞壁。中胶层是植物细胞刚**完成的子细胞之间,最先形成的间隔,主要成份是果胶质(一种多糖类),随后在中胶层两侧形成初生细胞壁,初生细胞壁主要由果胶质、木质素和少量的蛋白质构成。次生细胞壁主要由纤维素组成的纤维排列而成,如同一条一条的线以接近直角的方式排列,再以木质素等多糖类黏接。
(2)真菌细胞壁则是由几丁质、纤维素等多糖类组成,其中几丁质是含有碳水化合物和氨,性柔软,有弹性,与钙盐混杂则硬化,形成节肢动物的外骨骼。几丁质不溶于水、酒精、弱酸和弱碱等液体,有保护功能。
(3)细菌细胞壁组成以肽聚糖为主。

2、细胞膜
细胞壁的内侧紧贴着一层极薄的膜,叫做细胞膜(Cell Membrane)。这层由蛋白质分子和磷脂双分子层组成的薄膜,水和氧气等小分子物质能够自由通过,而某些离子和大分子物质则不能自由通过。因此,它除了起着保护细胞内部的作用以外,还具有控制物质进出细胞的作用:既不让有用物质任意地渗出细胞,也不让有害物质轻易地进入细胞。此外,它能进行细胞间的信息交流。
细胞膜在光学显微镜下不易分辨。用电子显微镜观察,可以知道细胞膜主要由蛋白质分子和脂类分子构成。在细胞膜的中间,是磷脂双分子层,这是细胞膜的基本骨架。在磷脂双分子层的外侧和内侧,有许多球形的蛋白质分子,它们以不同深度镶嵌在磷脂分子层中,或者覆盖在磷脂分子层的表面。这些磷脂分子和蛋白质分子大都是可以流动的,可以说,细胞膜具有一定的流动性。细胞膜的这种结构特点,对于它完成各种生理功能是非常重要的。

病理科工作用房的设置有哪些要求?

1、原则上年病理检查例数少于2000例(不包括细胞学)者不宜建立病理科。
  2、未设立病理科的医院,其病理诊断任务应由当地卫生行政部门协调,并送有资质的病理科承接;或根据地域条件等实际情况,采用相邻医院共同组建病理诊断中心的方式解决,具体应由省级病理质控中心和当地卫生行政部门共同协调。
  3、医疗机构若新成立病理科,应由省级病理质控中心根据当地病理科水平和发展的需要,对申请医院的病理科人员、设备等条件进行评估,并将评估结果反馈给当地卫生行政部门,作为决策的依据。
  4、原则上**甲等综合医院的常规病理组织学诊断应≥8000例(次)/年,**乙等综合医院≥4000例(次)/年,二级医院应≥2000例(次)/年。
  5、开设病理科的医疗机构,其医疗机构执业许可证诊疗项目中必须有“病理科”的登记。
  6、医院病理科应**建制,一个医疗机构内只允许设置一个病理科。为适应医院临床学科的发展和需求,提倡病理科发展亚专科化,包括细胞病理、消化病理、肾病理、血液病理、神经病理、妇科病理、眼科病理、皮肤病理等。病理科以外的其他科室及其下属的实验室不得从事病理检查及诊断工作。